Вторник, 30.04.2024, 04:15 Приветствую Вас Гость | Регистрация | Вход |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Все для тебя ищущий! | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Учебные материалы
Современные методы изучения ДНК
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Для изучения днк необходимо выделение нукл/к-т из ядросодержащих кл или из биолог жидкостей. Методы амплификации днк и электрофоретическая детекция: Фрагменты гена амплифицируются (копируются) посредством ПЦР(кон ХХв Мюллис нобел прем). а) Вводится 2 праймера(искусств синтез олигосах, комплементарные 3'-концам анализируемых уч днк). б) ввод смеси являющейся материалом для нов цепей. в)днк-полимераза-фермент, обеспеч-й синтез нов цепи днк по принципу комплемент. г)реакционный буффер-смесь катализаторов для норм аботы полимеразы. д)анализируемый образец-нов днк,подлежащая амплификации. 1)термическая денатурация, 2)отжиг праймеров(присоединение к днк), 3)элонгация(синтер цепи). Может быть применена лигазная цепная р-я(она быстрее), лигазы-гр ферментов, катализирующих соединение= лигирование полинуклеотидных цепей. Може быть применены рестрикционные методы анализа генома;рестриктазы-ферменты расщепляющие двойную днк. Для визуализации рез-ов используюься различные методы. Электрофорезом-основан на разделении мол днк по подвижности в электрич поле, котор зависит от их размера. Метод гель-электрофореза. Секвенирование-метод определения нуклеотидной последовательности днк. а)50-е г ХХв-секвен по а/к-тной последовательности белков-ферментов(недостаток что распознаются только экзоны, а так же вырожденность генетич кода). б)60-е г ХХв Сэнгер секвен рнк в)в конце 20в прямой метод «плюс-минус». После пцр смесь разделяют на 8 частей и в «+» системе проводят р-ю в присутствии 1 из нуклеотидов, а в «-» с -в отсутствии 1 из них. Сейчас широко применяются методы автоматического секвенир-я | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Просмотров: 6229 | |
Всего комментариев: 0 | |